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转染***简介：

其中病毒载体的特点是整和效0率高, 可使外源***在宿主细胞中长期表达，缺点是存在潜在的安全***性。电穿孔法及显微注0射法的特点是转染率较高，缺点是需要昂贵的仪器，前者对细胞的损伤较大，后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注0射，不适合大量细胞研究的需要。

人们一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染***。由于脂质类转染***对细胞的毒性是由其脂质特性决定的，众多的研究者和生物公司将新一代转染***的开发聚焦在非脂质体的聚合物上，并已有一些优0秀的***产品上市。

已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起***表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如***ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15)；转染siRNA造成脱靶效应等等。细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小，脂质体这些作用是造成细胞毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰，甚至影响研究的结论。这已引起了许多研究者的注意。

注意事项：

1. 质粒 DNA：请用能够去除内毒0素的方法制备高质量的质粒 DNA。

2. 稀释液：0.85%（W/V）生理盐水，用低内毒0素纯水配制，高压消毒或除0菌过滤。

3. 培养基：经过 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常规培养基测试，推荐使用含 5~10%牛血0清的

DMEM，若转染效果不理想可尝试其它培养基。

4. 以 24 孔细胞板转染实验为例，推荐每孔低内毒0素质粒 DNA 用量为 2μg、转染***用量为 3~5μl，请

在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告***进行优化。

5. 如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系，可在细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染，从而可节省

18~24 小时的转染前细胞培养时间。

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

重要提示

1. 与常规转染***不同，使用 QuickShuttle 可在贴壁细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染（立传立转），从而可节省 18~24 小时的转染前细胞培养时间。

2. QuickShuttle 极大简化了转染操作，转染***和质粒混合后无需室温静置孵育，可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染，而且无需在转染后补加血0清或更换培养基，整个转染操作可在一分钟内完成。

3. 立传立转、一分钟完成转染操作和高转染效率等优点使得部分使用 QuickShuttle 的转染实验可在细胞传代后 24 小时内完成，从而比常规转染***节约 24~48 小时。