企业等级: | 普通会员 |
经营模式: | 生产加工 |
所在地区: | 江苏 苏州 |
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公司地址: | 江苏省苏州市相城开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢810 |
发布时间:2022-08-08 04:04:01
自备材料:
1、细胞计数器
2、细胞冻存管
3、超低温冰箱或液氮
4、超净工作台
操作步骤(仅供参考):
1、培养细胞至对数生长晚期,显微镜观察其外观、形态、有无污染等,取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞,用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化,进行细胞计数;如为悬浮生长细胞,进行细胞计数。
2、500~1000g离心5min,弃上清。
3、加入适量的通用细胞冻存液,重悬细胞,使细胞浓度达到1~10×106/ml,置于冻存管中,密闭、不要拧的太紧,避免弯曲变形。
4、一般遵循1℃/min的速率进行冷冻。亦可采用4℃20min,-20℃30min,-70℃过夜,***后置于液氮罐中长期存储。
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1. 按每管1ml分装到细胞冻存管中。
2. 直接放入-70℃冰箱中冻存。
备注:无需程序降温盒或从4℃到-20℃到-70℃冰箱的繁琐程序降温。
3.24小时后转入液氮中冻存。
备注:对于不同细胞,使用本细胞冻存液也可在-70℃冰箱中保存数周甚至数月,但建议***好尽快转入
液氮中保存。
4.复苏方法同常规细胞冻存液。
备注:对于大多数对DMSO不敏感的细胞,复苏时甚至传代前无需去除细胞冻存液,实际上本细胞冻存
液中某些成分具有一定的促细胞生长特性。
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