病毒包装***服务至上「博特龙」

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博奥龙公司主要产品有抗0体制0备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

Western Blot-抗0体检测技术服务?

一、服务内容

1、从动物细胞、人或动物***、***、植物等样品中提取蛋白，重组蛋白、血0清、培养上清等样品

2、对样品中蛋白进行半定量分析

3、Western blot检测

（1） 电泳：聚丙0烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离蛋白样品

（2） 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）

（3） 杂交：用抗0体鉴定膜上的特定蛋白（INCUBATION: Antibody）

（4） 化学发光检测（ECL），胶片***，TotalLab Quant软件读取IOD值（可选）

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β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照。也常被用于免0疫染色观察细胞的微丝结构。在用作Western的参照时，Actin抗0体和Tubulin抗0体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。

保存条件：

      Actin抗0体-20℃保存，Western一抗稀释液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀释液优先推荐4℃保存，长期不使用可以考虑-20℃保存，但冻融可能会导致出现轻微的浑浊和少量不溶物。

抗0体亚型鉴定原理：

抗0体亚型鉴定的原理是利用双抗0体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克0隆抗0体或特异亲和纯化的单克0隆抗0体的类和亚类（可区分出 IgG1﹨IgG2a﹨IgG2b﹨IgG3﹨IgM﹨IgA）。采用小鼠抗0体共有位点的二抗包被微孔板，与加入的培养上清中的小鼠抗0体结合，再加入HRP 标记的抗小鼠各类、亚类的抗0体来分别反应，***后用 TMB 底物系统显色并用稀***终止，再通过酶0标仪检测吸光度来判断被测单克0隆抗0体的类或亚类。

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1、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好，随盒存放。

2、拿放板子时不要剧烈抖动，以免孔间交叉污染出现错误结果。

3、本***一般不会出现两个阳性，但出现两个阳性的现象不论在进口或国产***中都是真实存在的，一般会一个 OD 很高,另一个很低但却还能判为阳性，实验分析表明这种情况下以 OD 高值孔为准，出现这种情况有多重原因：
(1)培养的细胞中有饲养细胞残留，
(2)抗0体本身存在变异，
(3)样品为非特异亲和纯化的抗0体或样品是腹0水，
(4)上清出现少量污染，
(5)实验操作粗放，
(6)加错***。

4、通用阳性对照数据并不一定完全一样，仅作为***有效指示。