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发布时间:2022-06-16 13:30:14
1. 9 腹0水效价的测定
1 mg /mL 的 MRJ 原核表达白每孔 100 μL,包被Elisa 酶标板过夜,以 SP2 /0 细胞培养上清为阴性对照,用间接 Elisa 方法检测腹0水的效价。同时 WesternBlot 检测抗0体使用于 Western Blot 的效价,用 MRJ 重组蛋白做 抗 原 进 行 SDS-PAGE 电 泳,用 制 备 的 MRJ单克0隆 抗0体 作 为 一 抗,设置抗0体稀释浓度 分别为1∶ 500; 1 ∶ 1 000; 1 ∶ 2 000; 1 ∶ 3 000; 1 ∶ 5 000。进 行Western Blot 检测。
***与仪器
试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 quickantibody 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合*** 50% PEG 购自美国 Sigma 公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP) 标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠,本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 由南京大学赠送,融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他***均为国产分析分析纯。
仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材,96 孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液***( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱
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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
通过皮下或肌肉单点***免0疫动物,小鼠每针次100μl,家兔每针次200μl。
(1)佐剂与抗原混合后应尽快***,若放置时间较长出现水油相分层,则必须按上述步骤2重新振荡混匀;
(2)抽入针管前应摇匀,抽入针管后应尽快***;
(3)尽量选择引流淋巴0结附近(如腋窝和腹0股0沟附近)的皮下或肌肉进行免0疫。
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