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经营模式: | 生产加工 |
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刘总 先生
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发布时间:2022-05-23 12:27:46
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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。
1.选择部分样品进行预实验,参考目的蛋白一抗说明书进行3个稀释度的预实验
2.向客户反馈预实验结果,等待客户确认预实验结果后确定是否进行正式实验
3.请您提供质量0保证的一抗(或委托我公司代购)。抗0体的使用量通过预实验后进行确认,一般不回收使用一抗
4.如果需要对膜上目的蛋白进行抗0体剥离(洗脱或者 stripping)的,请提前说明
水佐剂免0疫步骤
步骤一:用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。
步骤二:充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。
步骤三:通过后腿小腿肌肉***免0疫小鼠,每只小鼠100μl。备注:本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象,抽入针管前应充分混匀,抽入针管后应尽快***。
步骤四:第21天按同样方式加强免0疫一针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。
步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定,抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内, 随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注:若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求,可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。
在血液、和***液里的抗0体主要是IgM和IgG。在正常血浆中,IgM约占血浆内总抗0体量的10%。IgM的杀菌、溶菌、促进吞噬作用及凝集抗原的作用都比IgG强,它也能中和***外和阻止病毒。人若缺乏IgM,可能引起致死性的。IgG占血浆内抗0体总量的70%~0%,由于它的分子量较小,通透性大,所以在体内分布。它能进入***液和脑脊液内;并能通过进入胎儿体内。IgA具有明显的和抗病毒作用,分泌型的IgA存在外分泌物中,如初乳、泪液、唾液、胆汁以及消化道、呼吸道和尿、生殖道的粘膜分泌液中。而且,血液中的,IgA也能在里形成大量分泌型IgA,由胆汁排人十二指肠,构成外界物质通向体内的道防线,阻止上述管腔内的抗原物质在管壁附着。因此,IgA是抗粘膜的一个重要抗0体,使整个内脏的功能都能得到增强。
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