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抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的制备和鉴定

摘要: 制备抗 果 蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体可用于研究果蝇 mrj 的 生 物 学 功 能，使 用 IPTG 诱 导 重 组 质 粒pET28a-mrj 在大肠杆0菌 Rosetta 中表达，重组蛋白经过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化后免0疫 BALB/c 小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 融合，经克0隆和筛选获得了能分泌抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的杂交瘤细胞株。腹0水制备后获得单克0隆抗0体，通过 ELISA 和 Western Blot 对所获得的抗0体进行鉴定，结果表明所制备单克0隆抗0体能够特异性结合于原核及真核细胞表达的 MRJ 蛋白，可用于研究 mrj ***的生物学功能。

关键词: mrj; 细胞融合; 单克0隆抗0体

杂交瘤细胞的筛选与克0隆

细胞融合后，培养于添加了 HAT 的选择培养基的 96 孔板中，培养一天后半定量换液，培养基更换时应注意轻缓，第 5 天能在显微镜下看到明显的杂交瘤细胞克0隆，第 7 天左右，杂交瘤细胞能长至铺满孔底约 1 /10。此时进行 ELISA 检测养心细胞孔。取细胞培养上清对 MRJ 融合蛋白进行间接 Elisa检测，筛选出能分泌抗0体的杂交瘤细胞孔，有限稀释法对阳性孔进行亚克0隆，经过 3 次亚克0隆后，获得了能够稳定 分 泌 抗 MRJ 融合蛋白单克0隆抗0体的细胞株。对杂交瘤细胞株按从 96 孔板-24 孔板-10 cm 培养皿的顺序扩大培养，部分细胞用于腹0水制备单抗，部分细胞冻存备用。

产品描述

抗原特异性CD4+ TH1和CD8+ CTL细胞在胞内感0染和肿0瘤的发生0发展过程中具有重要作用，因此成为相关***的免0疫学研究和疫0苗研发的重要内容。蛋白抗原（包括灭活病原微生物、肿0瘤细胞裂解物、重组或提取的蛋白抗原、合成肽等）在氢氧化铝等常规佐剂作用下不能有效诱生抗原特异性CD4+ TH1和CD8+ CTL反应。Quick CTL细胞免0疫佐剂是一种具有自主知识产权、独0特配方的新型水溶性细胞免0疫佐剂，能够作为蛋白抗原佐剂免0疫小鼠诱生有效的抗原特异性CD4+ TH1和CD8+ CTL反应。