HRP-山羊抗小鼠IgA服务放心可靠 博特龙

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博奥龙公司主要产品有抗0体制0备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

Western Blot-抗0体检测技术服务?

一、服务内容

1、从动物细胞、人或动物***、***、植物等样品中提取蛋白，重组蛋白、血0清、培养上清等样品

2、对样品中蛋白进行半定量分析

3、Western blot检测

（1） 电泳：聚丙0烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离蛋白样品

（2） 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）

（3） 杂交：用抗0体鉴定膜上的特定蛋白（INCUBATION: Antibody）

（4） 化学发光检测（ECL），胶片***，TotalLab Quant软件读取IOD值（可选）

实验步骤：

1、弃去板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。

2 、吸弃板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 A 和显色剂 B 各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。

3 、ELISA***盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类。更可将反应终止液（每孔50μl）终止反应后用酶0标仪450nm 测长，630nm 参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类(阳性对照 OD 一般不小于0.8，阴性对照一般不高于0.15，阳性判定标准：样品 OD 大于阴性 OD+0.15，阴性 OD 低于0.05按0.05算)。

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单克0隆抗0体（单抗制备）制备过程有以下几个步骤：

步骤一：细胞免0疫

免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免0疫方案进行免0疫***。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官，刺激相应B淋巴细胞克0隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

步骤二：细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾0脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

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1937年，有人用电泳法将人的蛋白分为白蛋白、甲种球蛋白、乙种球蛋白和丙种球蛋白，不久又证明了抗0体存在于丙种球蛋白中，长期以来丙种球蛋白就成为抗0体的代名词。但以后又发现部分乙种球蛋白亦具有抗0体功能。因此，把具有抗0体活性及抗0体分子相关的球蛋白，统称为球蛋白。1964年在日内瓦召开的人类球蛋白命名会议上，把抗0体统一命名为球蛋白G、球蛋白A、球蛋白M，以后又发现了球蛋白D和球蛋白E，共有五类球蛋白，而每一类球蛋白又有许多亚型。