小鼠抗人IgE诚信企业推荐 博特龙

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水佐剂免0疫步骤

步骤一：用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度。备注：推荐使用的抗原用量为（1）免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg（通常为10~20μg）；（2）免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg（通常为1~2μg）。

步骤二：充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注：本佐剂产生沉淀属正常现象，与抗原混合操作越快越好。

步骤三：通过后腿小腿肌肉***免0疫小鼠，每只小鼠100μl。备注：本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快***。

步骤四：第21天按同样方式加强免0疫一针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。

步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内，　随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注：若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求，可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。

博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

多抗制备的概念：由多个B淋巴细胞克0隆所产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗0体。多抗制备主要包括以下几个步骤：免0疫动物、佐剂、免0疫原、免0疫、取血等。

多抗制备的制备步骤

一、器材

剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼0科***镊子(游离血管用)一把、直头眼0科***剪(剪血管用)一把，***刀架，***刀片，注0射器(1ml、10ml，25ml)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径18cm)、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，***缝合线，塑料放血管，纱布等。

二、***

生理盐水

弗氏完全佐剂

弗氏不完全佐剂

二甲0苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN3

三、免0疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免0疫100-200μg免0疫原。

四、兔子的选择

兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。

五、免0疫

用生理盐水稀释免0疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下0***和后大腿进行肌肉***。每个区域大约用1/4的免0疫原。这样免0疫原可以持久存在从而提高免0疫应答。

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每种抗0体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活，也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害，如抗核抗0体、抗双链DNA抗0体、抗甲状腺球蛋白抗0体等一些自身抗0体的产生，对***可造成危害。

(1)初次反应产生抗0体：当抗原次进入机体时，需经一定的潜伏期才能产生抗0体，且抗0体产生的量也不多，在体内维持的时间也较短。

(2)再次反应产生抗0体：当相同抗原第二次进入机体后，开始时，由于原有抗0体中的一部分与再次进入的抗原结合，可使原有抗0体量略为降低。随后，抗0体效价迅速大量增加，可比初次反应产生的多几倍到几十倍，在体内留存的时间亦较长。