亚类鉴定用ELISA***盒常用指南 博特龙公司

-20℃保存

本产品是含有次黄piào呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸苷（T）和甘氨酸的混合物，适用于杂交瘤筛选和细胞培养应用。

HAT选择性培养基，HAT是黄piào呤（Hypoxantin）、氨基蝶呤（Aminopterin）和胸腺嘧0啶脱氧核苷（Thymidin）三种物质英文首字母缩写，用于筛选具有次黄piào呤磷酸核糖转移酶（HPRT）或胸苷激酶（TK）活性缺陷细胞的培养基，是含有次黄piào呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸苷（T）和甘氨酸的完全培养基。在氨基蝶呤（二氢叶酸类似物）存在下，这种酶缺陷的细胞不能通过核苷酸合成旁路合成次黄piào呤和胸苷。HPRT和TK缺陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨0髓杂交瘤细胞选择性培养基

本品提供了FITC快速标记所需全部***，用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗0体/多肽或者其他大分子的标记。待标记物上的赖氨酸残基的游离ε-氨基可与FITC 发生亲核反应，形成硫0脲连接而共价结合，形成稳定性的偶联物。

      产品特点

1.     使用方法简单，无需额外准备***

2.     通过离心脱盐和去除游离的FITC，无需透析或者凝胶过滤

3.     本***盒配备指示剂，确保游离FITC去除完全

1.***盒组分

1.1. 包被缓冲液（10×浓缩） 25ml ×1 瓶

1.2. BSA 封闭液（10×浓缩）100ml ×1 瓶

1.3. 洗涤缓冲液（20×浓缩）250ml ×1 瓶

1.4. 可溶性 TMB 单组分 250ml×1 瓶

1.5. 终止液 120ml×1 瓶

1.6. HRP 标记抗小鼠 IgG (H+L)抗0体：1 ml ×1 支(0.1mg/ml)

储存在 2～8℃，有效期 2 年，可以完成 20 块 96 孔酶标板检测。

2.***盒不提供的***或耗材

2.1. 小鼠的一抗

2.2. 亲和层析纯化的未标记捕获抗0体

2.3. 酶标板（不建议用***培养板）

2.4. 吸水纸、毛巾或棉布

2.5. 蒸馏水或纯化水

2.5. 移液器***瓶等

2.6. 多通道排***和加液槽

2.7. 手套

2.8. ***头

3.检测原理

3.1 杂交瘤筛选

可以检测杂交瘤培养液中的特异性抗0体，使用适当标记二抗，可以检测抗原特异性的小

鼠抗0体。

4.3.2 洗板

加标本和酶标抗0体后需要洗涤，通过洗涤可以去掉未反应***帮助降低本底。满意的洗涤方法是孔与孔之见均匀一致并且没有液体的相互污染。洗涤时将板子翻转并将液体甩掉拍净。洗涤液中含有 0.1%吐温-20 以***非特异性结合。如果实验过程中断，应该将酶标板中加入洗涤液以避免酶标板干燥。

4.3.3 HRP 标记抗0体

HRP 标记的抗0体作为检测抗0体，与底物反应后，使底物显色。实验过程中避免接触叠

氮钠，叠氮钠可使 HRP 失活。

4.3.4 底物

使用 TMB 底物，一般来说，产生的颜色与待测物浓度呈正比。