HRP-兔抗猫IgG(H+L)常用指南 博特龙公司

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

1.选择部分样品进行预实验，参考目的蛋白一抗说明书进行3个稀释度的预实验

2.向客户反馈预实验结果，等待客户确认预实验结果后确定是否进行正式实验

3.请您提供质量0保证的一抗（或委托我公司代购）。抗0体的使用量通过预实验后进行确认，一般不回收使用一抗

4.如果需要对膜上目的蛋白进行抗0体剥离（洗脱或者 stripping）的，请提前说明

注意事项：

1、Actin抗0体在Western实验后，注意回收稀释的抗0体。回收的抗0体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗0体，包括已经使用过的稀释抗0体，4℃保存。

2、 回收后重复使用的抗0体，使用方法同新鲜稀释的抗0体。如果在重复使用过程中发现抗0体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗0体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗0体。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

单克0隆抗0体（单抗制备）制备过程有以下几个步骤：

步骤一：细胞免0疫

免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免0疫方案进行免0疫***。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官，刺激相应B淋巴细胞克0隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

步骤二：细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾0脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

人们抽取动物的血液，分离出含抗0体的。这种体内生产抗0体的传统方法有许多缺点。例如所获得的抗0体不纯，不能连续生产，动物饲养与管理工作繁重等，故长期以来***家们一直在探索在试管内（即体外）生产抗0体的方法， 1976年英国剑桥大学两位科学家Milstein和Koh1er将小鼠瘤细胞与小鼠的脾细胞杂交。小鼠瘤细胞能在体外增殖传代并能分泌无抗0体活性的球蛋白；小鼠脾细胞能产生针对某种抗原的抗0体，但不能在体外增殖。将两者融合成一种杂交瘤细胞，后者继承了两个亲代细胞的特点，既可在体外增殖，又可产生针对某种抗原的抗休。一个杂交瘤细胞在体外不断增殖所形成的细胞集团，被称之为。