山羊抗人IgG γ chain的行业须知「多图」

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

实验步骤：

1 、首先将ELISA***盒***室温（大约30分），然后用纯水把清洗液配成工作浓度（1份浓缩清洗液加19份纯水）。

2 、取出酶标板。每个标本需要6孔，阳性对照6孔，阴性对照6孔。多余的用自封袋保存，记得放入干燥剂。

3 、将标本检测孔每孔先加入标本稀释液各50μl。然后将50μl 细胞培养上清（或特异亲和纯化的抗0体）再加入酶标微孔板，每个标本加6孔；阳性对照和阴性对照孔不加标本稀释液也是各加6孔每孔100μl。贴上封板膜37℃温育30分钟。

1、水佐剂不***抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克0隆抗0体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

2、水佐剂是一种水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免0疫动物。

3、水佐剂使用肌肉免0疫途径，与常规小鼠单克0隆抗0体制备过程中使用足垫免0疫或脾内免0疫相比，极大地方便了使用。

4、水佐剂的***重要用途是可方便地用于制备小鼠多克0隆抗0体。常规多克0隆抗0体制备多使用兔子，不但免0疫针次多、抗原用量大和抗0体产生慢，而且由于技术要求较高而往往需要委托外单位制备。使用快速水溶免0疫佐剂，任何动物实验人员均可方便快速地制备小鼠多克0隆抗0体，只需要简单地免0疫5只小鼠，即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克0隆抗0体。

5、水佐剂建议室温运输，2~8oC保存，无菌取用，有效期6个月。

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多抗制备的概念：由多个B淋巴细胞克0隆所产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗0体。多抗制备主要包括以下几个步骤：免0疫动物、佐剂、免0疫原、免0疫、取血等。

多抗制备的制备步骤

一、器材

剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼0科***镊子(游离血管用)一把、直头眼0科***剪(剪血管用)一把，***刀架，***刀片，注0射器(1ml、10ml，25ml)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径18cm)、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，***缝合线，塑料放血管，纱布等。

二、***

生理盐水

弗氏完全佐剂

弗氏不完全佐剂

二甲0苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN3

三、免0疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免0疫100-200μg免0疫原。

四、兔子的选择

兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。

五、免0疫

用生理盐水稀释免0疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下0***和后大腿进行肌肉***。每个区域大约用1/4的免0疫原。这样免0疫原可以持久存在从而提高免0疫应答。

什么是单克0隆抗0体？

单克0隆抗0体(MAb)，是针专一的抗原决定簇产生的抗0体，单克0隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.K?hler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗0体的B细胞与肿0瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗0体。

单克0隆抗0体制备的原理是什么？

要制备单克0隆抗0体需先获得能合成专一性抗0体的单克0隆B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现骨0髓瘤细胞可在体外生长繁殖，应用细胞杂交技术使骨0髓瘤细胞与免0疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂0种的骨0髓瘤细胞。这种杂0种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗0体的特性，也有骨0髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克0隆抗0体。