HRP-山羊抗小鼠IgG(H+L)的行业须知「博特龙」

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

水佐剂是一种用于制备小鼠单克0隆抗0体和多克0隆抗0体的免0疫佐剂，与常规使用的弗氏佐剂相比，具有免0疫针次少、抗原用量低、抗0体产生快、抗0体滴度高、抗0体亲合力高、不***抗原天然构象和使用方便等优点。

水佐剂使用重要提示

1、水佐剂只需两针免0疫，无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备，与弗氏佐剂相比可至少减少两针次免0疫。

2、水佐剂通过减少免0疫针次和降低每针次抗原用量，从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为
（1）免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg（通常为10~20μg）；

（2）免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg（通常为1~2μg）。

3、水佐剂抗0体产生快，抗0体滴度高，抗0体亲合力高，无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备，只需要在三周内进行两针免0疫，通常在第五周即可获得ELISA滴度高1:10000~1:10000000的高亲合力抗0体水平。

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注：

抗原***以前需要收集一些正常血0清，已备检测抗0体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定，大概需要四天左右时间，可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。

免0疫用的抗原必须纯化，否则影响抗0体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能***。将抗原液与佐剂等比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化，乳化过程比较费时、费力，但若乳化不充分，会影响免0疫的效果，振荡后，1000rpm离心一分钟，如水相和油相不分层即可***。首0次免0疫用FCA，以后都用FIA。

免0疫方法可采用背部多点***法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下0***，每点注0.1ml，间隔2周后再于上述部位选不同点***(不要选择临近位点，否则***愈合不好)。每次免0疫的抗原量约100μg。免0疫次数在四五次即可，抗原用量大可以减少次数。

不同细胞表面具有不同Ig的Fc受体，分别用FcγR、FcεR、FcαR等来表示。当Ig与相应抗原结合后，由于构型的改变，其Fc段可与具有相应受体的细胞结合。抗0体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用：

1．介导I型反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒，释放组胺，合成由细胞FcεRI结合。

2．调理吞噬作用 调理作用（opsonization）是指抗0体、补体C3b、***B等调理素(opsonin)促进吞噬***等颗粒性抗原。

3．发挥抗0体依赖的细胞介导的细胞毒作用。