HRP-兔抗人Ig咨询*** 博特龙技术有限公司

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

1、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好，随盒存放。

2、拿放板子时不要剧烈抖动，以免孔间交叉污染出现错误结果。

3、本***一般不会出现两个阳性，但出现两个阳性的现象不论在进口或国产***中都是真实存在的，一般会一个 OD 很高,另一个很低但却还能判为阳性，实验分析表明这种情况下以 OD 高值孔为准，出现这种情况有多重原因：
(1)培养的细胞中有饲养细胞残留，
(2)抗0体本身存在变异，
(3)样品为非特异亲和纯化的抗0体或样品是腹0水，
(4)上清出现少量污染，
(5)实验操作粗放，
(6)加错***。

4、通用阳性对照数据并不一定完全一样，仅作为***有效指示。

水佐剂免0疫步骤

步骤一：用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度。备注：推荐使用的抗原用量为（1）免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg（通常为10~20μg）；（2）免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg（通常为1~2μg）。

步骤二：充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注：本佐剂产生沉淀属正常现象，与抗原混合操作越快越好。

步骤三：通过后腿小腿肌肉***免0疫小鼠，每只小鼠100μl。备注：本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快***。

步骤四：第21天按同样方式加强免0疫一针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。

步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内，　随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注：若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求，可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。

单克0隆抗0体（单抗制备）制备过程有以下几个步骤：

步骤一：细胞免0疫

免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免0疫方案进行免0疫***。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官，刺激相应B淋巴细胞克0隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

步骤二：细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾0脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

单克0隆抗0体的大量制备

单克0隆抗0体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。

1、体内诱生法 取Balb/c小鼠。

首先腹腔***0.5ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克0隆抗0体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注0射器抽取腹0水，即可获得大量单克0隆抗0体。

2、体外培养法

将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克0隆抗0体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克0隆抗0体。但这种方法产生的抗0体量有限。近年来，各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗0体的生产量。