兔抗大鼠IgG(H+L)推荐「博特龙」

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Western Blot-抗0体检测技术服务?

一、服务内容

1、从动物细胞、人或动物***、***、植物等样品中提取蛋白，重组蛋白、血0清、培养上清等样品

2、对样品中蛋白进行半定量分析

3、Western blot检测

（1） 电泳：聚丙0烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离蛋白样品

（2） 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）

（3） 杂交：用抗0体鉴定膜上的特定蛋白（INCUBATION: Antibody）

（4） 化学发光检测（ECL），胶片***，TotalLab Quant软件读取IOD值（可选）

1、预实验及正式实验服务：帮助客户设计样品上样顺序以符合论0文发表要求

2、免费进行蛋白内参检测（所有内参抗0体均免费提供）

样品要求

1、细胞＞1×107；***＞30mg；***湿重＞1mg；植物＞100mg；血0清＞50ul；等

2、样品蛋白浓度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/样品

客户提供材料

1、新鲜或正确保存的样品（按照我们的要求提供）

2、目的蛋白一抗：我们可以给客户免费提供抗0体查找服0务

3、阳性对照样品（尽量提供）

4、相关文献（可选）

提交给客户结果

1、预实验***结果（胶片及扫描图），预实验采取3个一抗稀释度

2、正式实验***结果（胶片及扫描图）

3、完整实验报告

4、IOD值分析报告（可选）

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水佐剂免0疫步骤

步骤一：用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度。备注：推荐使用的抗原用量为（1）免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg（通常为10~20μg）；（2）免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg（通常为1~2μg）。

步骤二：充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注：本佐剂产生沉淀属正常现象，与抗原混合操作越快越好。

步骤三：通过后腿小腿肌肉***免0疫小鼠，每只小鼠100μl。备注：本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快***。

步骤四：第21天按同样方式加强免0疫一针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。

步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内，　随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注：若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求，可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。

博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

选择性培养

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨0髓瘤细胞因缺乏次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死0亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死0亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄 piao呤鸟piao呤磷酸核糖转移酶，并具有骨0髓瘤细胞能无0限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。