小鼠抗人IgG Fab常用指南「博特龙」

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1.建议提供目的蛋白阳性表达样品（纯蛋白、有阳性表达的细胞或***、商品化的阳性对照产品等）作为阳性对照

2.免费内参检测为：beta-actin，beta-tubulin，GAPDH，Histone H3， Lamin B1等

3.如需进一步数据分析：TotalLab Quant专0业软件读取IOD值、条带的Normalization处理、以及发表论0文时所用条带的处理，请另询价

4.对条带结果有特殊要求，请另询价

5.双方签订合同后，收取70%首付后启动预实验

6.WB特殊要求请咨询

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

注意事项：

1、虽然本***盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。

2、在检测腹0水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的 BF06004小鼠单抗 Ig 类/亚类鉴定用酶标二抗套装。它会给您带来满意的结果，同时您也可以使用抗原包被板来解决此类问题。

3、手洗板子时一定要把孔加满，停留10秒然后弃尽，***后要拍干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。

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多抗制备的概念：由多个B淋巴细胞克0隆所产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗0体。多抗制备主要包括以下几个步骤：免0疫动物、佐剂、免0疫原、免0疫、取血等。

多抗制备的制备步骤

一、器材

剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼0科***镊子(游离血管用)一把、直头眼0科***剪(剪血管用)一把，***刀架，***刀片，注0射器(1ml、10ml，25ml)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径18cm)、弯头止血钳四把，直头止血钳两把，***缝合线，塑料放血管，纱布等。

二、***

生理盐水

弗氏完全佐剂

弗氏不完全佐剂

二甲0苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN3

三、免0疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免0疫100-200μg免0疫原。

四、兔子的选择

兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。

五、免0疫

用生理盐水稀释免0疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下0***和后大腿进行肌肉***。每个区域大约用1/4的免0疫原。这样免0疫原可以持久存在从而提高免0疫应答。

选择性培养

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨0髓瘤细胞因缺乏次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死0亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死0亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄 piao呤鸟piao呤磷酸核糖转移酶，并具有骨0髓瘤细胞能无0限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。