HRP-山羊抗人IgG(H+L)择优推荐「博特龙」

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备***产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关***及诸多特色产品和特色技术服务。

抗0体亚型鉴定原理：

抗0体亚型鉴定的原理是利用双抗0体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克0隆抗0体或特异亲和纯化的单克0隆抗0体的类和亚类（可区分出 IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）。采用小鼠抗0体共有位点的二抗包被微孔板，与加入的培养上清中的小鼠抗0体结合，再加入HRP 标记的抗小鼠各类、亚类的抗0体来分别反应，***后用 TMB 底物系统显色并用稀***终止，再通过酶0标仪检测吸光度来判断被测单克0隆抗0体的类或亚类。

实验步骤：

1、弃去板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。

2 、吸弃板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂 A 和显色剂 B 各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。

3 、ELISA***盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类。更可将反应终止液（每孔50μl）终止反应后用酶0标仪450nm 测长，630nm 参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的 Ig 类或亚类(阳性对照 OD 一般不小于0.8，阴性对照一般不高于0.15，阳性判定标准：样品 OD 大于阴性 OD+0.15，阴性 OD 低于0.05按0.05算)。

注意事项：

1、虽然本***盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。

2、在检测腹0水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的 BF06004小鼠单抗 Ig 类/亚类鉴定用酶标二抗套装。它会给您带来满意的结果，同时您也可以使用抗原包被板来解决此类问题。

3、手洗板子时一定要把孔加满，停留10秒然后弃尽，***后要拍干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。

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选择性培养

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨0髓瘤细胞因缺乏次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死0亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死0亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄 piao呤鸟piao呤磷酸核糖转移酶，并具有骨0髓瘤细胞能无0限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。