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发布时间:2021-12-23 08:41:37
由于改良免0疫法只需二次基础免0疫而常规免0疫法则需要2倍于改良法的免0疫次数,所以改良法抗原用量明显少于常规法,从而大大减少了实验成本的消耗。
此外,本实验通过对比两种免0疫方法的细胞融合率及抗0体阳性率,发现改良免0疫法均显著高于常规免0疫法。
经过后续实验,证明改良法免0疫小鼠的杂交瘤细胞经二次克0隆化后,抗0体阳性率可达检测孔的90%以上。杂交瘤细胞体外连续传代培养,并冻存复苏后仍具有分泌AFP—McAb的能力,并经染色体计数结果表明已成功获得一株AFP—McAb细胞株。这表明改良法与常规方法具有同样的有效性和稳定性。
美国出版协会(AAP)于1998年创建了DOI以来,制定了标准,并建立了相应的解析系统,目前在出版界得到了广泛和成功的应用。DOI已用于期刊、电子书、技术报告、标准等各种文献类型的标识,并向与文献相关的科学数据、版权、甚至作者标识等多元化方向发展。截止2008年4月底,DOI的注册量已超过了3,000多万个,应用DOI的出版社和学会有2,500多家,图书馆1,300多个。万方数据公司已获得了在中国注册DOI代理机构权。
抗原制备及纯化
抗原制备: 参照文献[10]制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的,37 ℃ 培养过夜,次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养,当菌液 OD600达 0. 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG,37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验,有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG,37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品,超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化,考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ,可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。
作用机制:
佐剂增强免0疫应答的机制可能有:①改变抗原物理性状,延长抗原在机体内的存在时间和保持对免0疫系统的持续激0活作用,佐剂中的矿物油成分主要起缓释作用,有利于抗原在体内缓慢释放,延缓抗原在体内降解,从而更有效地刺激免0疫系统。②使抗原易被巨噬细胞吞噬,刺激单核巨噬细胞系统,增强其对抗原的处理和呈递抗原的能力。③促进淋巴细胞的增殖、分化,从而扩大和增强机体的免0疫应答的效应。
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