小鼠抗鸡IgY IgG常用解决方案「多图」

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1、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好，随盒存放。

2、拿放板子时不要剧烈抖动，以免孔间交叉污染出现错误结果。

3、本***一般不会出现两个阳性，但出现两个阳性的现象不论在进口或国产***中都是真实存在的，一般会一个 OD 很高,另一个很低但却还能判为阳性，实验分析表明这种情况下以 OD 高值孔为准，出现这种情况有多重原因：
(1)培养的细胞中有饲养细胞残留，
(2)抗0体本身存在变异，
(3)样品为非特异亲和纯化的抗0体或样品是腹0水，
(4)上清出现少量污染，
(5)实验操作粗放，
(6)加错***。

4、通用阳性对照数据并不一定完全一样，仅作为***有效指示。

1、水佐剂不***抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克0隆抗0体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

2、水佐剂是一种水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免0疫动物。

3、水佐剂使用肌肉免0疫途径，与常规小鼠单克0隆抗0体制备过程中使用足垫免0疫或脾内免0疫相比，极大地方便了使用。

4、水佐剂的***重要用途是可方便地用于制备小鼠多克0隆抗0体。常规多克0隆抗0体制备多使用兔子，不但免0疫针次多、抗原用量大和抗0体产生慢，而且由于技术要求较高而往往需要委托外单位制备。使用快速水溶免0疫佐剂，任何动物实验人员均可方便快速地制备小鼠多克0隆抗0体，只需要简单地免0疫5只小鼠，即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克0隆抗0体。

5、水佐剂建议室温运输，2~8oC保存，无菌取用，有效期6个月。

注：

抗原***以前需要收集一些正常血0清，已备检测抗0体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定，大概需要四天左右时间，可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。

免0疫用的抗原必须纯化，否则影响抗0体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能***。将抗原液与佐剂等比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化，乳化过程比较费时、费力，但若乳化不充分，会影响免0疫的效果，振荡后，1000rpm离心一分钟，如水相和油相不分层即可***。首0次免0疫用FCA，以后都用FIA。

免0疫方法可采用背部多点***法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下0***，每点注0.1ml，间隔2周后再于上述部位选不同点***(不要选择临近位点，否则***愈合不好)。每次免0疫的抗原量约100μg。免0疫次数在四五次即可，抗原用量大可以减少次数。