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甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白，分子量约70，000～72，000道尔顿^，在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成，正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿，亦见于其他多种畸形，如先0天性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏***有密切关系一。因此制备高0效特异的AFP单克0隆抗0体(McAb)具有重要的意义。

综上所述，新的改良的小鼠免0疫方法具有很好实验效果。孕妇血0清AFP水平的变化与唐氏***有密切关系。目前孕中期人绒毛膜促性腺激0素(HCG)联合AFP筛查唐氏***胎儿已成为欧美亚许多***常规服务项目之一，在假阳性率为5％左右情况下，这种筛查方案对唐氏***的检出率可以达65％～75％[9-11|。因而免0疫方法测定血0清中AFP浓度已在临床得到广泛应用。羊水和母体血0清中AFP浓度的升高，对胎儿***管缺陷和其他遗传缺陷的产前诊断，也具有应用价值。在大多数原发性肝细胞***和内胚窦***患者血0清中AFP浓度升高，检测AFP有助于肿0瘤的早期诊断，也是在治0疗过程中观察疗0效的一项指标。采用本实验新改进的方法制备AFP—McAb，对胚胎发育、***变过程中***表达、AFP的纯化、肝0***的导向治0疗以及提供诊断0***等都有重要的实际应用意义。

***与仪器

试 剂: pET28a-mrj 转 Rosetta 菌 0种 由 本 实 验 室 所保存。免0疫佐剂 quickantibody 购自北京康碧泉公司;HAT 选择性培养基、HT 培养基、8-Azaguanine 和融合*** 50% PEG 购自美国 Sigma 公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 养 基 为 Hyclone 产 品; 辣 根 过 氧 化 物 酶( HRP) 标记山羊抗小鼠 IgG ; 8 周龄雌性健康 BALB / c 小鼠，本实验室饲养; 小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 由南京大学赠送，融合前两星期复苏并经 8-Azaguanine筛选; 其他***均为国产分析分析纯。

仪器: 二 氧 化 碳 培 养 箱( Thermo) ; 倒 置 显 微 镜( Olympus) ; 细胞培养耗材，96 孔板、24 孔板、6 孔细胞培养板、移液***( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白层析柱

使用方法    

1.  用生理盐水将抗原稀释到2倍***终浓度（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl用量配制）。备注：推荐使用的抗原用量为小鼠每针次10-20μg、家兔每针次20-50μg。

2.  用振荡器充分混匀佐剂，无菌条件下取出所需用量（按小鼠每针次50μl、家兔每针次100μl）与抗原按体积比1:1混合，并用振荡器剧烈振荡5-10min，直至静止放置10min水油相不分层。备注：与抗原混合前佐剂分层属正常现象，但必须充分混匀后才能取用。

3.  通过皮下或肌肉单点***免0疫动物，小鼠每针次100μl，家兔每针次200μl。

（1）佐剂与抗原混合后应尽快***，若放置时间较长出现水油相分层，则必须按上述步骤2重新振荡混匀；

（2）抽入针管前应摇匀，抽入针管后应尽快***；

（3）尽量选择引流淋巴0结附近（如腋窝和腹0股0沟附近）的皮下或肌肉进行免0疫。