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发布时间:2021-11-26 01:30:59
QuickAntibody系列免0疫佐剂有哪些特点?
与常规使用的弗氏佐剂相比,QuickAntibody免0疫佐剂具有免0疫周期短、针次少、无需乳化、抗原用量低、抗0体滴度高、抗0体亲合力高、易获得构象型表位的抗0体等多方面优点,详述如下:
1. QuickAntibody只需两针免0疫,无论是用于单克0隆还是多克0隆抗0体制备,与弗氏佐剂相比可减少免0疫针次。
2. QuickAntibody通过减少免0疫针次和降低每针次抗原用量,从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-50μg(通常为小鼠5-20μg,
兔子20-50μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒或全***以及病毒样颗粒抗原每针次1-10μg(通常为小鼠1-5μg ,兔子5-10μg)。
甲胎蛋白(AFP)是一种胎儿特异性糖蛋白,分子量约70,000~72,000道尔顿^,在胚胎肝0脏和卵黄囊中合成,正常人血中含量甚微。1972年有人首0次报道开放性神0经管畸形胎儿、羊水中有高水平的AFP。若胎儿羊水中AFI’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿,亦见于其他多种畸形,如先0天性shen病、食道或肠闭锁、囊0性水瘤、骶尾部畸胎瘤、Rh血型不和、先天愚型、先0天性性腺发育不全等。1983年发现母体血0清AFP水平的降低与唐氏***有密切关系一。因此制备高0效特异的AFP单克0隆抗0体(McAb)具有重要的意义。
抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的制备和鉴定
摘要: 制备抗 果 蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体可用于研究果蝇 mrj 的 生 物 学 功 能,使 用 IPTG 诱 导 重 组 质 粒pET28a-mrj 在大肠杆0菌 Rosetta 中表达,重组蛋白经过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化后免0疫 BALB/c 小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 融合,经克0隆和筛选获得了能分泌抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的杂交瘤细胞株。腹0水制备后获得单克0隆抗0体,通过 ELISA 和 Western Blot 对所获得的抗0体进行鉴定,结果表明所制备单克0隆抗0体能够特异性结合于原核及真核细胞表达的 MRJ 蛋白,可用于研究 mrj ***的生物学功能。
关键词: mrj; 细胞融合; 单克0隆抗0体
饲养层细胞制备
于细胞融合前一天,准备饲养层细胞,常选用小鼠腹腔渗出细胞,其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是: 一方面做饲养细胞,另一方面巨噬细胞可以吞噬死0亡的细胞和细胞碎片,为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的数目应适宜,过少则不能提供杂交瘤细胞所需要的生长因子,过多会阻碍杂交瘤细胞的贴壁,一般以铺满孔底 30% 为好。
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